Análise comparativa entre os métodos microbiológicos membrana filtrante e espalhamento na recuperação de escherichia coli K12 em solução salina propositalmente contaminada
Palavras-chave:
Escherichia coli, OGM, Detecção, Espalhamento, Membrana filtrante, Recuperação, HumanosResumo
Objetivo: testar e comparar o desempenho dos métodos membrana filtrante e espalhamento na
recuperação de culturas puras de E.coli K12 em solução salina propositalmente contaminada. Metodologia:
foram realizadas diluições seriadas a partir de uma ampola, contendo uma concentração conhecida de
E. coli K12, para obtenção de 3 concentrações diferentes em solução salina, as quais foram analisadas
simultaneamente pelos dois métodos. Resultados: a taxa de recuperação do método membrana filtrante
(98,0 ± 1,5%) foi superior ao do método de espalhamento (24,0 ± 47,6%), apresentando diferença estatística
significativa (p=0,0002) e linearidade (R2= 0,9805). A robustez do tempo de incubação, também foi, aqui,
analisada, não havendo diferença significativa nas contagens dos tempos 18, 21 e 24 horas para ambos os
métodos. Conclusão: os resultados encontrados servirão de linha de base para validação de um método
microbiológico capaz de detectar baixas concentrações de E.coli em amostras, oriundas de um processo
produtivo de uma indústria biotecnológica. Outros parâmetros, como sensibilidade, especificidade, serão
avaliados, e, para tal, o meio de cultivo, será substituído por um meio cromogênico, seletivo e diferencial
para E. coli.
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Referências
01. SZERMER-OLEARNIK, B. et al. Comparison
of microbiological and physicochemical
methods for enumeration of microorganisms.
Postepy Hig Med Dosw. v. 68, p. 1392-6, jan.
2014. Disponível em: < https://www.ncbi.nlm.
nih.gov/labs/articles/25531702/>. Acesso em:
08 Fev. 2017.
02. DAVIS, C. Enumeration of probiotic strains:
Review of culture-dependent and alternative
techniques to quantify viable bacteria. Journal
of Microbiological Methods. v. 103, p. 9-17,
ago. 2014.
03. BEN-DAVID, A.; DAVIDSON, C. E. Estimation
method for serial dilutions experiments. Journal
of Microbiological Methods. v. 107, p. 214-21,
dez. 2014.
04. GOLDMAN, E.; GREEN, L. H. (Org.).
Practical Handbook of Microbiology. 3. ed.
Florida: CRC Press, 2015.
05. WU, V. C. H. A review of microbial injury and
recovery methods in food. Food Microbiology.
v. 25, n. 8, p. 735-44, set. 2008.
06. HEREDIA, N. et al. Validation of a novel rinse
and filtration method for efficient processing
of fresh produce samples for microbiological
indicator enumeration. Journal of Food
Protection. v. 78, n. 3, p. 525-30, mar. 2015
07. ICH Harmonised Tripartite Guideline.
International Conference on Harmonisation
of Technical Requirements for Registration of
Pharmaceuticals for Human Use. Validation of
analytical procedures: text and methodology
Q2 (R1). Chicago, USA, 2005. Disponível em:
<http://www.ich.org/fileadmin/Public_Web_
Site/ICH_ Products/Guidelines/Quality/Q2_
R1/Step4/Q2_R1__Guideline.pdf>. Acesso em
20 Mar. 2016.
08. USP. Microbiologi <61>. Disponível em:
<https://hmc.usp.org/sites/default/files/
documents /HMC/GCs-Pdfs/c61.pdf>. Acesso
em: 15 Mar. 2 cal Examination of Nonsterile
Products: Microbial Enumeration Tests 016.
09. GANDRA, J. A. C. D. et al. Molecular and
microbiological methods for Escherichia coli
K12 traceability in the fermentation process.
Journal of Biotechnology and Biomaterials. v.
5, n. 6, out. 2015.
10. BRASIL. Ministério da Ciência, Tecnologia
e Inovação. Comissão Técnica Nacional
de Biossegurança. Resolução Normativa
Nº 2, de 27 de novembro de 2006.
Diário Oficial da União. 27 Nov. 2006.
Disponível em: <http://agrobiobrasil.
o rg . b r / w p c o n t e n t / u p l o a d s / 2 0 1 3 / 11 /
RESOLU%C3%87%C3%83O-NORMATIVAN%
C2%BA-2-DE-27-DE-NOVEMBRODE-
2006.pdf>. Acesso em: 08 fev. 2017.
11. SIMÕES, G. A. R. et al. Genetic markers for
detection of Escherichia coli K-12 harboring
ampicillin-resistance plasmid from an industrial
wastewater treatment effluent pond. Genetics
and molecular research. v. 15, n. 2, jun. 2016.
12. LANGE, B.; STRATHMANN, M.; OβMER,
R. Performance validation of chromogenic
coliform agar for the enumeration of Escherichia
coli and coliform bacteria. Letters in Applied
Microbiology. v. 57, n. 6, p. 547-53, dez. 2013.
13. ROMPRE, A. et al. Detection and enumeration
of coliforms in drinking water: current
methods and emerging approaches. Journal of
Microbiological Methods. v. 49, n.1, p. 31-54,
mar. 2002.
14. REASONER, D. J. Heterotrophic plate count
methodology in the United States. International
Journal of Food Microbiology. v. 92, n. 3, p.
307-15, mai. 2004.
15. BOUBETRA, A. et al. Validation of alternative
methods for the analysis of drinking water and
their application to Escherichia coli. Applied
and Environmental Microbiology. v. 77, n. 10,
p. 3360-7, mai. 2011.
16. WOHLSEN, T. et al. Evaluation of the methods
for enumerating coliform bacteria from water
samples using precise reference standards.
Letters in Applied Microbiology. v. 42, n. 4,
p.350-6, abr. 2006.
17. HERIGSTAD, B.; HAMILTON, M.;
HEERSINK, J. How to optimize the drop plate
method for enumerating bacteria. Journal of
Microbiological Methods. v. 44, n. 2, p. 121-9,
mar. 2001.
18. BOGOSIAN, G. et al. Death of Escherichia coli
K-12 strains W3110 in soil and water. Applied
and Environmental Microbiology. v. 62, n. 11,
p. 4114-20, nov. 1996.
19. DAFALE, N. A. et al. Quantification of
ceftriaxone sodium in pharmaceutical
preparations by a new validated microbiological
bioassay. Analytical Methods. v. 4, n. 8, p. 2490-
8, jul. 2012.
of microbiological and physicochemical
methods for enumeration of microorganisms.
Postepy Hig Med Dosw. v. 68, p. 1392-6, jan.
2014. Disponível em: < https://www.ncbi.nlm.
nih.gov/labs/articles/25531702/>. Acesso em:
08 Fev. 2017.
02. DAVIS, C. Enumeration of probiotic strains:
Review of culture-dependent and alternative
techniques to quantify viable bacteria. Journal
of Microbiological Methods. v. 103, p. 9-17,
ago. 2014.
03. BEN-DAVID, A.; DAVIDSON, C. E. Estimation
method for serial dilutions experiments. Journal
of Microbiological Methods. v. 107, p. 214-21,
dez. 2014.
04. GOLDMAN, E.; GREEN, L. H. (Org.).
Practical Handbook of Microbiology. 3. ed.
Florida: CRC Press, 2015.
05. WU, V. C. H. A review of microbial injury and
recovery methods in food. Food Microbiology.
v. 25, n. 8, p. 735-44, set. 2008.
06. HEREDIA, N. et al. Validation of a novel rinse
and filtration method for efficient processing
of fresh produce samples for microbiological
indicator enumeration. Journal of Food
Protection. v. 78, n. 3, p. 525-30, mar. 2015
07. ICH Harmonised Tripartite Guideline.
International Conference on Harmonisation
of Technical Requirements for Registration of
Pharmaceuticals for Human Use. Validation of
analytical procedures: text and methodology
Q2 (R1). Chicago, USA, 2005. Disponível em:
<http://www.ich.org/fileadmin/Public_Web_
Site/ICH_ Products/Guidelines/Quality/Q2_
R1/Step4/Q2_R1__Guideline.pdf>. Acesso em
20 Mar. 2016.
08. USP. Microbiologi <61>. Disponível em:
<https://hmc.usp.org/sites/default/files/
documents /HMC/GCs-Pdfs/c61.pdf>. Acesso
em: 15 Mar. 2 cal Examination of Nonsterile
Products: Microbial Enumeration Tests 016.
09. GANDRA, J. A. C. D. et al. Molecular and
microbiological methods for Escherichia coli
K12 traceability in the fermentation process.
Journal of Biotechnology and Biomaterials. v.
5, n. 6, out. 2015.
10. BRASIL. Ministério da Ciência, Tecnologia
e Inovação. Comissão Técnica Nacional
de Biossegurança. Resolução Normativa
Nº 2, de 27 de novembro de 2006.
Diário Oficial da União. 27 Nov. 2006.
Disponível em: <http://agrobiobrasil.
o rg . b r / w p c o n t e n t / u p l o a d s / 2 0 1 3 / 11 /
RESOLU%C3%87%C3%83O-NORMATIVAN%
C2%BA-2-DE-27-DE-NOVEMBRODE-
2006.pdf>. Acesso em: 08 fev. 2017.
11. SIMÕES, G. A. R. et al. Genetic markers for
detection of Escherichia coli K-12 harboring
ampicillin-resistance plasmid from an industrial
wastewater treatment effluent pond. Genetics
and molecular research. v. 15, n. 2, jun. 2016.
12. LANGE, B.; STRATHMANN, M.; OβMER,
R. Performance validation of chromogenic
coliform agar for the enumeration of Escherichia
coli and coliform bacteria. Letters in Applied
Microbiology. v. 57, n. 6, p. 547-53, dez. 2013.
13. ROMPRE, A. et al. Detection and enumeration
of coliforms in drinking water: current
methods and emerging approaches. Journal of
Microbiological Methods. v. 49, n.1, p. 31-54,
mar. 2002.
14. REASONER, D. J. Heterotrophic plate count
methodology in the United States. International
Journal of Food Microbiology. v. 92, n. 3, p.
307-15, mai. 2004.
15. BOUBETRA, A. et al. Validation of alternative
methods for the analysis of drinking water and
their application to Escherichia coli. Applied
and Environmental Microbiology. v. 77, n. 10,
p. 3360-7, mai. 2011.
16. WOHLSEN, T. et al. Evaluation of the methods
for enumerating coliform bacteria from water
samples using precise reference standards.
Letters in Applied Microbiology. v. 42, n. 4,
p.350-6, abr. 2006.
17. HERIGSTAD, B.; HAMILTON, M.;
HEERSINK, J. How to optimize the drop plate
method for enumerating bacteria. Journal of
Microbiological Methods. v. 44, n. 2, p. 121-9,
mar. 2001.
18. BOGOSIAN, G. et al. Death of Escherichia coli
K-12 strains W3110 in soil and water. Applied
and Environmental Microbiology. v. 62, n. 11,
p. 4114-20, nov. 1996.
19. DAFALE, N. A. et al. Quantification of
ceftriaxone sodium in pharmaceutical
preparations by a new validated microbiological
bioassay. Analytical Methods. v. 4, n. 8, p. 2490-
8, jul. 2012.
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Publicado
2020-12-06
Como Citar
APARECIDA CORREIA DURÃES GANDRA, J. .; CÉZAR SILVA MACHADO, W. .; MOISÉS ERICSSON DE OLIVEIRA, A. .; SANTOS NOGUEIRA, H. .; DA SILVA GOMES MAGALHÃES, S. .; SANCHES, G. .; APARECIDO DE SOUSA XAVIER, M.; REJANE ERICSSON DE OLIVEIRA XAVIER, A. . Análise comparativa entre os métodos microbiológicos membrana filtrante e espalhamento na recuperação de escherichia coli K12 em solução salina propositalmente contaminada. Revista Unimontes Científica, [S. l.], v. 19, n. 1, p. 14–24, 2020. Disponível em: https://www.periodicos.unimontes.br/index.php/unicientifica/article/view/2034. Acesso em: 21 nov. 2024.
Edição
Seção
Artigos Originais
